THEME DE LA RECHERCHE :

Trouver des marqueurs spécifiques permettant de caractériser un individu à partir de son ADN mitochondrial.

L'ADN est le support de l’information génétique chez tous les êtres humains. Il est contenu dans toutes les cellules et plus précisément dans le noyau des cellules.

Les mitochondries sont des organites des cellules, qui fournissent de l’énergie à cette même cellule, et aussi, à l’être tout entier (homme, plante, animal...)

Les mitochondries possèdent leur propre ADN et cet ADN est plus utile pour effectuer une filiation génétique.

Pour effectuer cette filiation, on compare plusieurs ADN mitochondriaux, d’individus donnés, avec des marqueurs que l’on aura créé. On détermine alors le niveau relationnel entre ces individus s’il existe. On peut aller ainsi du simple lien de parenté, au lien unissant une population, ou même toutes les populations avec un individu, ou un ancêtre commun. Car l’ADN se conserve à travers les siècles dans les os, les cheveux, les ongles, ...

 

EXPERIMENTATION :

L'ADN mt possède deux segments hypervariables où le taux de mutation est beaucoup plus élevé qu'ailleurs. En déterminant les principaux points de mutation, on peut venir marquer ces régions par des sondes qui correspondent exactement à la séquence voulue.

Les Sondes :

Nous avons utilisé 23 sondes réparties en 9 groupes. Chaque groupe correspond à une mutation donnée dans la région polymorphique sur les 2 segments hypervariables.

Dans chaque groupe, les sondes diffèrent de quelques bases, ce qui entraîne différentes possibilités d'hybridation des sondes. Une seule sonde, au plus dans chaque groupe, va pouvoir s'hybrider sur le segment hypervariable. Cette combinaison d'hybridation des 9 sondes permettra d'avoir une carte qui caractérisera un individu.

 

PROTOCOLE :

Extraction de l'ADNmt par la méthode du Chelex 100

Amplification de l'ADNmt par PCR (Polymerase Chain Reaction).

Préparation des membranes d'hybridation et dépôt du produit d'amplification par PCR.

Procédure d'hybridation des membranes par les sondes.

Détection des hybridations ou sondes biotynilées.

Conjugaison des sondes biotynilées par un révélateur colorimétrique.

Visualisation et résultats.